養細胞有哪些經驗和教訓? | 知乎問答精選

 

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養細胞有哪些經驗和教訓?

2016年08月15日 知乎問答精選 暫無評論 閱讀 710 ℃ 次

知乎用戶的回答(22票):

嚴格無菌操作,多噴噴酒精,要是對滅菌的東西不放心,自己包自己送自己烘乾。

不要和別人共用試劑耗材,自己準備一套。

有可能的話在拿到新細胞的時候做好支原體衣原體檢測。

水浴鍋很髒,生化培養箱要是得手動加濕的話盤裡的水也會很髒,勤換(滅菌水加進去)。

晚上離開的時候最好給細胞房照紫外,超淨台是用完就開吧。

最好的是同一時間就你一個人在用細胞房在養細胞。

初步就想到這麼多,雖然我準備轉碩閃人了,但一想起這些玩意,還是有回答問題的衝動。

知乎用戶的回答(22票):

養過一段時間的Hela和Siha,都是跟別人要的。分享一點經驗吧。

1、別怕浪費。槍頭什麼的只要有可能污染就換,如果用酒精燈就什麼都稍微烤一下,別直接放到火上,離一段距離。

2、動作要既輕柔又有力。動作太重會有一堆一堆的氣泡,動作太輕就吹不下來。。。剛開始的時候吹細胞太痛苦了,稍微一下就起泡。後來就是吹的時候槍裡的培養基不要一次全都壓出來,留一點,槍的最頭部盡量深的在液面以下。

3、離開過操作台的東西再進操作台之前一定要用酒精噴一遍,包括一切實驗耗材、儀器、以及你帶著手套的手。

4、實驗結束後對實驗台的消毒。紫外什麼的,用前用後都照個30分鐘。

5、身體的各個部分盡量的少接觸不需要接觸的地方的地方。比如實驗台,又比如培養箱內部。

6、細胞的密度根據細胞的性質、傳代的時間以及自己的心情來定。培養基的話最多最多不要超過2天就要換一次。細胞可以不傳代,但是培養基是一定要換的。

大概就是,不該碰的地方不碰,有影響的地方少碰;該使勁的時候絕對不含糊,不該使勁的地方一定忍住。如果是比較簡陋的操作台就一定要擺個酒精燈,所有操作緊密圍繞在酒精燈周圍進行。如果是高級檯子就多用酒精噴噴。感覺生物的實驗,心疼錢就還是不要做了。。。

最後一點點絕對非科班的經驗。癌細胞真是堅挺。有一次實在是不想傳了,放了5天吧,感覺都長了幾層出來來,培養基都黃了。抱著試一試的心情傳了一次,又堅強的活過來了。。。當然,狀態肯定也差的很了。

【juice wong的回答(8票)】:

個人經驗:

1、不管買的細胞、惠贈的細胞,剛拿到手趕緊的做兩件事:1、檢測是否有支原體污染;2、迅速擴增凍存。

2、發現有污染迅速處理掉,特別是當你養了很多種細胞時;細菌污染,真菌污染很容易發現,支原體污染的話,細胞會長的慢,買個支原體檢測的kit定期檢測一下。

3、細胞房日常的值日清潔是必須的,此外還要定期熏蒸。

4、細胞的傳代一定要規律,保持相同的confluency和傳代時間間隔,不要隨心所欲或者拖延...

5、個人衛生。

【籍盼的回答(14票)】:

養了三年細胞,各種腫瘤細胞,大家的回答已經很全面了,稍微補充一點自己的看法:

1、我們實驗室細胞基本上都是在ATCC(ATCC: The Global Bioresource Center)買的,一個新細胞在養之前,可以看看ATCC上面說明的細胞特點,包括細胞正常生長的狀態圖、傳代、培養基的類型等。

2、不同細胞生長週期不同,有的生長很快,比如說MDA-MB-231,傳代的時候取離心懸液的十分之一就已經足夠了,有的又是特別慢,等的人心焦,BT474就是,傳代是一分二,復甦起始的時候兩周多才能長滿,所以就要在培養細胞的過程中多多摸索了。

3、對於嬌弱的細胞,就得細心呵護了,胰酶消化不能過久,吹得時候要輕柔,離心時候也要注意轉速和時間,每天都要去看一下細胞,肉眼觀察培養基狀況、顯微鏡下觀察細胞生長狀況。

4、凍存細胞復甦後第二天最好更換一次培養基。

5、培養箱隔一段時間徹底用酒精棉擦洗一次。

6、養細胞最大的教訓:不能偷懶!!

【李逸翔的回答(3票)】:

污染方面的話:

0.自己的細胞自己養……血的教訓……

1.在生物安全櫃(或者超淨台),槍頭,血清管,血清,培養基,瓶子都足夠好,並且細胞房有良好的衛生措施(比如隔離服,手套,口罩,清潔,HEPA等等)且不違法操作原則的情況下,你其實很難污染……

2.上述條件不完備的情況下,就要多注意無菌操作了:比如要用的東西提前拿到檯子裡照啊(不過這個其實也不大好,因為會擋住紫外線),使用前SDS+酒精擦檯子啊,進出超淨台一定要酒精擦手……

3.少對細胞說話,多靠內心來感動它們(是的!心不誠是不可以的!)至少1天看1次啊

知乎用戶的回答(22票):

養細胞真的不難,最關鍵幾點:

1、所有的東西使用最好的,如果你用的血清、培養皿、培養基、胰酶什麼的都是進口的,真的很難相信你會把細胞養壞。

2、動作要快,胰酶消化,換液什麼,細胞暴露在空氣中的時間越少越好。另外,要掌握好胰酶消化時間,所謂的細胞狀態差,很多時候是傳代的原因。

3、有時間的話,需要細胞計數,傳相應數目的細胞到培養皿中,可以大致清楚細胞的生長曲線,不會臨時要處理,手足無措。

4、要做什麼心裡要非常清楚,合理安排時間,細胞房的實驗穿插進行,可以節省很多時間,也不會耽誤別人的實驗。

5、個人的實驗器具自己收一套,不要和別人混用,最近換了什麼新的東西稍微記一下,試劑一旦懷疑污染,馬上丟。

6、細胞房不能進去太多人,避免相互干擾。

暫時就寫這麼多吧。

【匿名用戶的回答(4票)】:

現在一大型藥企養細胞做檢測,工作量很大,很多地方都沒辦法非常仔細的做。但是兩年下來只出現過一次污染,總結一下心得:

1、好的潔淨室,空調系統跟得上。

2、好的生物安全櫃,硬件跟的上。

3、瓶子移液器吸頭大都是進口,耗材跟的上。

除了這些就是自己的操作習慣了

4、任何東西不要從敞開的瓶口上面經過。

5、雖然酒精燈會干擾安全櫃氣流但是還是需要一盞用來勤燒瓶口。

6、實驗時所用材料的位置擺放要順手,污染源和已滅菌物品要分開放置。

同樣的實驗做了三年,馬上要辭職了。匿了。

【neutrino的回答(2票)】:

樓上的同學說的很多了,補充一下,細胞污染,尤其是細菌污染,是一個概率性事件,在超淨台外開幾次培養皿不一定會污染,一直小心也會有污染的時候。養成良好習慣的前提下該帶菌操作就要果斷帶菌操作,有自己的判斷最重要。對於拿到結果的細胞及時凍存一批也是有必要的,在長期培養的過程中細胞狀態一直在變化,補實驗時用細胞庫的細胞不一定會有理想的結果就哭了。

【羽毛的回答(0票)】:

前面的經驗已經很好了,我的感覺是培養基盡量小瓶分裝,拆開後能用完就用完,盡量避免大瓶裝,多次開封

【李成晚的回答(0票)】:

晚上離開的時候最好給細胞房照紫外,超淨台是用完就開吧。

【胡曉波的回答(0票)】:

建議買一本《細胞培養》,這邊也有下載地址:細胞培養.pdf_免費高速下載

知乎用戶的回答(22票):

大環境注意好了基本都沒問題,尤其是培養室的大環境很重要。

【Tammy Tang的回答(0票)】:

一切按照操作規範來,一切的一切,任何的偷懶和無所謂只會換回最後的辛酸淚,然後重新來過!

【Lamo Liu的回答(0票)】:

除了各位提到的預防污染問題,還建議不用沒事幹就去看細胞,或是搖一搖。換液的時候換一半就好,不要全換掉

知乎用戶的回答(22票):

知乎還有這麼多搞生物的,養細胞的。出乎我意料之外啊。

就是感慨一下,沒養過多長時間細胞,也養的很爛。早就不做這行了。折疊吧。

【老豺的回答(2票)】:

養細胞細胞這個東西呢有的時候真說不清

養過一段時間的巨噬細胞,一開始操作各種謹慎小心,隨時默念各種無菌原則,培養基什麼的都用的進口的,但細胞就是萎靡不振

兩個多星期過後實在懶得管,換液等操作也很隨意的草草進行,酒精也懶得噴,結果這貨卻開始瘋長,過了幾天居然達到一天要傳一次代,而且數量甚至可以一傳三

所以說,有的細胞就是矯情。

【胡匯泉的回答(1票)】:

同學的血的教訓,一個小組做實驗,不知道那個孩子在用滴瓶的時候,滴管和平板接觸了,然後整個試劑都污染了,然後好多人用,一個月的努力白費了。

【三七的回答(0票)】:

看起來就很厲害的容器

曾經發生過因為用的器皿外表太過破舊導致被清潔阿姨倒掉的慘劇……

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